USA har bedt 15 diplomater fra Cubas ambassade i Washington om at forlade landet, meddeler det amerikanske udenrigsministerium.
De får syv dage til at rejse hjem.
Det sker i forlængelse af USA's påstand om mystiske angreb på amerikanske diplomater i Havana.
22 personer med tilknytning til USA's repræsentation i Cuba har fået høreskader eller hjerneskader under deres ophold i landet. Tallet er tirsdag opjusteret fra 21 til 22.
Trak halvdelen af amerikanske diplomater hjem
I sidste uge besluttede Trumps regering at trække over halvdelen af sine diplomater på ambassaden i Havana hjem til USA.
Beslutningen blev truffet som følge af Cubas mangelfulde beskyttelse af USA's diplomater i Havana, hedder det.
USA og Cuba var ærkefjender i årtier under den kolde krig. Men under præsident Barack Obama skete en begyndende forsoning, der endte med, at de to lande igen åbnede repræsentationer hos hinanden.
De blev åbnet i sommeren 2015. Knap et år senere landede Obama i Cuba som den første amerikanske præsident i næsten et århundrede.
Hjernerystelse og hovedpine
Men tøbruddet var kortvarigt. I sommer, efter at præsident Donald Trump havde overtaget magten i Washington, kom de første meldinger om mystiske personskader fra diplomater på ambassaden.
Flere kunne berette om mistet hørelse. Nogle fik hjernerystelser, og de led af kvalme og hovedpine.
Den cubanske regering har afvist at være involveret i de mystiske angreb.
Den amerikanske udenrigsminister, Rex Tillerson, har sagt, at USA trods krisen vil opretholde de diplomatiske forbindelser til Cuba.
Natten til tirsdag slap det via unavngivne embedsmænd ud, at USA ville kræve antallet af cubanske diplomater reduceret i Washington.
Årsagen var, hed det, at Cuba havde for mange diplomater i USA. Der skulle ske en udjævning, så Cuba ikke var overrepræsenteret.
/ritzau/Reuters